I kjemi er fortynning prosessen med å redusere konsentrasjonen av et stoff i en løsning. Kjedefortynning er gjentatt fortynning av en løsning for raskt å øke fortynningsfaktoren. Denne prosedyren utføres vanligvis i eksperimenter som krever svært fortynnede løsninger med høy nøyaktighet. For eksempel eksperimenter som involverer konsentrasjonskurver på en logaritmisk skala eller eksperimenter for å bestemme tettheten av bakterier. Kjedefortynninger er mye brukt i vitenskapelige eksperimenter som biokjemi, mikrobiologi, farmakologi og fysikk.
Steg
Metode 1 av 2: Utføre grunnleggende fortynning
Trinn 1. Bestem passende fortynningsmiddel
Det er veldig viktig å bestemme væsken som skal brukes til fortynning. Mange løsninger er oppløselige i destillert vann, men dette er ikke alltid tilfelle. Hvis du fortynner bakterier eller andre celler, gjør du det på et kulturmedium. Væsken du velger vil bli brukt til alle kjedefortynninger.
Hvis du er i tvil om hvilket fortynningsmiddel du skal bruke, søk hjelp eller se på nettet. Se etter eksempler fra andre som har gjort lignende kjedefortynninger
Trinn 2. Klargjør et antall prøverør som inneholder 9 ml fortynningsmiddel
Prøverør brukes til tomme fortynninger. Først legger du den ufortynnede prøven i det første røret, og gjør deretter fortynningene etter hverandre til de neste rørene.
- Merk alle rørene som brukes før fortynningen starter, slik at du ikke blir forvirret når eksperimentet er i gang.
- Hvert rør fylles med 10 fortynninger, med utgangspunkt i røret hvis stoffet ikke er fortynnet. Fortynningen i det første røret er 1:10, etterfulgt av 1: 100 i det andre røret, 1: 1000 for det tredje, og så videre. Bestem mengden fortynning som må utføres på forhånd, slik at du ikke sløser ut fortynningsoppløsningen.
Trinn 3. Klargjør et reagensrør som inneholder minst 2 ml ufortynnet løsning
Minste mengde løsning som skal fortynnes for å utføre denne kjedefortynning er 1 ml. Hvis du bare bruker 1 ml, vil det ikke være noen ufortynnet løsning igjen. Merk BLM for ufortynnede løsninger.
Bland løsningen grundig før fortynning påbegynnes
Trinn 4. Utfør den første fortynningen
Ta 1 ml ufortynnet løsning fra BLM -reagensrøret med en pipette og legg det i et reagensrør merket 1:10 som inneholder 9 ml fortynningsmiddel, og bland deretter grundig. Det er nå 1 ml ufortynnet løsning i 9 ml fortynningsmiddel. Således har løsningen blitt fortynnet med en fortynningsfaktor på 10.
Trinn 5. Utfør den andre fortynningen
For den andre fortynningen, ta 1 ml oppløsning fra 1:10 -røret, og legg den deretter i 1: 100 -røret som også inneholder 9 ml fortynningsmiddel. Sørg for at løsningen i røret 1:10 er helt blandet før du legger den til neste rør. Sørg igjen for at fortynningen i 1: 100 -røret er fullstendig blandet. Løsningen fra 1: 10-røret ble fortynnet 10 ganger i 1: 100-røret.
Trinn 6. Fortsett denne fremgangsmåten for å utføre lengre kjedefortynninger
Denne prosessen kan gjentas så mange ganger som nødvendig for å oppnå ønsket løsningskonsentrasjon. I eksperimenter med konsentrasjonskurver kan du utføre kjedefortynninger for å produsere en rekke løsninger med fortynninger på 1, 1:10, 1: 100, 1: 1000.
Metode 2 av 2: Beregning av fortynningsfaktor og sluttkonsentrasjon
Trinn 1. Beregn forholdet mellom den siste fortynningen i kjedefortynningen
Det totale fortynningsforholdet kan bestemmes ved å multiplisere fortynningsfaktoren fra hvert trinn til det siste trinnet. Den matematiske illustrasjonen er med formelen Dt = D1 x D2 x D3 x… x D , D.t er den totale fortynningsfaktoren og D er fortynningsforholdet.
- La oss for eksempel si at du fortynner 1:10 4 ganger. Koble fortynningsfaktoren til formelen: Dt = 10 x 10 x 10 x 10 = 10.000
- Fortynningsfaktoren i det fjerde røret i denne kjedefortynningen er 1: 10.000. Konsentrasjonen av stoffet etter fortynningen er 10 000 ganger lavere enn før det ble fortynnet.
Trinn 2. Bestem konsentrasjonen av løsningen etter fortynning
For å bestemme den endelige konsentrasjonen av en løsning etter en kjedefortynning, må du kjenne den opprinnelige konsentrasjonen. Formelen er Cslutt = Cbegynnelse/D, Cslutt er den siste konsentrasjonen av den fortynnede løsningen, Cbegynnelse er den opprinnelige konsentrasjonen av den opprinnelige løsningen, og D er det forhåndsbestemte fortynningsforholdet.
- For eksempel: Hvis du starter med en celleoppløsning hvis konsentrasjon er 1 000 000 celler per ml og fortynningsforholdet er 1 000, hva er den siste konsentrasjonen av den fortynnede prøven?
-
Ved å bruke formelen:
- Cslutt = Cbegynnelse/D
- Cslutt = 1.000.000/1.000
- Cslutt = 1000 celler per ml.
Trinn 3. Kontroller at alle enhetene er like
Når du utfører en beregning, må du kontrollere at enhetene alltid er de samme på slutten av beregningen. Hvis den første enheten er celler per ml, må du sørge for at enhetene forblir de samme ved slutten av beregningen. Hvis den opprinnelige konsentrasjonen er deler per million (bpd), må sluttkonsentrasjonen også være i bpj -enheter.
